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DNA鑒定之適用于法醫(yī)DNA分型的STR

使用變異性較高DNA遺傳標(biāo)記,或聯(lián)合使用大量多態(tài)性較低的DNA遺傳標(biāo)記以獲得足夠的樣本識別能力,都可進行人類個體識別。正如第七章將進一步討論的,法醫(yī)樣本中的DNA有可能嚴(yán)重降解(如斷裂成小片段),經(jīng)常給PCR擴增帶來困難?;旌蠘颖疽财毡榇嬖?,如性侵害案件中的生物檢材經(jīng)常包含案犯和受害人的成分。

與小衛(wèi)星VNTR等位基因(400~1000bp)相比,小片段STR等位基因(100~400bp)更適用于法醫(yī)降解DNA分析。PCR擴增降解DNA樣本時,更易得到較小的產(chǎn)物片段。在小衛(wèi)星遺傳標(biāo)記中,小片段的優(yōu)勢擴增造成大片段等基因位點的丟失現(xiàn)象是小衛(wèi)星的一個顯著問題( Tully et al.,1993)。而且,使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小于500bp的DNA片段時,可以更容易達到單堿基分辨率。所以,基于生物學(xué)和技術(shù)方面的原因,較小的STR比大的少衛(wèi)星VNTR更有優(yōu)勢。
不同類型的STR系統(tǒng)中,四核苷酸重復(fù)比二核苷酸或三核苷酸重復(fù)更常用。一些實驗室也正在研究人類基因組中不常見五核苷酸和六核苷酸重復(fù)(Bacher,et a1.,1999)。在擴增STR等位基因時會出現(xiàn)的“stutter”條帶(影子帶)現(xiàn)象。Stutter產(chǎn)物是比真實等位基因產(chǎn)物少一個或多個重復(fù)單位的擴增子,是由PCR過程中鏈滑脫現(xiàn)象所致(Walsh et al.,1996)。四核苷酸重復(fù)的STR基因座中stutter產(chǎn)物能占等位基因產(chǎn)物的15%或更多。二核苷酸或三核苷酸重復(fù)者則可高達30%或更多,從而使混合樣本的分型結(jié)果更難解釋。另外,在分析雜合子樣本時,二或三核苷酸重復(fù)的遺傳標(biāo)記的等位基因產(chǎn)物之間相差二或三個堿基,而四核苷酸重復(fù)的等位基因則相差四個堿基,對于以片段大小為分離基礎(chǔ)的電泳技術(shù)麗言,后者顯然更有利于電泳分型。
因此,概言之,在法醫(yī)DNA分型中使用四核苷酸重復(fù)優(yōu)于二或三核苷酸重復(fù)或小衛(wèi)星VNrR:
(1)等位基因片段范圍較小,可進行多個基因座復(fù)合。
(2)等位基因片段范圍較小,可減少小片段優(yōu)勢擴增造成的等位基因丟失。
(3) PCR擴增片段較小,有利于獲得降解DNA的信息。
(4) stutter產(chǎn)物比二核苷酸重復(fù)少,利于混合樣本分析。
在過去的10年里,大量四核苷酸重復(fù)被用于人類個體識別。已選用的STR遺傳標(biāo)記包括:分折降解DNA檢材的短STR;分析混合樣本的低stutter STR;分析性侵害案件的男女混合樣本中男性特異的Y-STR(Carracedo及Iareu ,1998)。用于人類個體識別的候選STR基因座的選擇原則如下(Gill et al.,1996;Carracedo及Lareu,1998):
(1)較高的個人識別幾率,通常>0.9;觀察雜合度>70%。
(2)在染色體上的位置相距較遠j確保無連鎖。 
(3)與其他遺傳標(biāo)記復(fù)合檢測時易于得到結(jié)果,且具有重現(xiàn)性。
(4)低stutter產(chǎn)物。
(5)低突變率。
(6)預(yù)計的等位基因長度在90~500bp,片段越小越適合DNA降解檢材。
為達到充分利用產(chǎn)物的目的,法醫(yī)DNA分析中使用不同染色體的STR遺傳標(biāo)記,避免遺傳標(biāo)記間的連鎖。
聲明:該文觀點僅代表作者本人.
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