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親子鑒定報告中的Chelex 提取法

    現(xiàn)在法醫(yī)科學界流行的另一種DNA提取法,是直接在樣本中加入(例如血液、血痕或精液)螯合樹脂懸浮液。1991年引入法醫(yī)DNA界的Chelex?100Bio-rad Laboratories,Hercules,CA)是一種離子交換樹脂,常以懸浮液的形式加入樣本中(Walsh et al.,1991)。Chelex是苯乙烯和二乙烯基苯的共聚體,它包含成對的亞氨基乙酰乙酸,可螯合多價金屬離子,如鎂離子。就像磁鐵吸附鐵一樣,鎂離子也被吸附、連接起來。將鎂離子從反應體系中去除后,降解DNA的核酸酶會失活,從而保護DNA分子。

    在多數(shù)方法中,生物樣本,例如血痕,加入% Chelex懸浮液煮沸幾分鐘后細胞破裂釋放DNA。而開始的樣本清洗有利于去除污染以及亞鐵血紅素和其他蛋白質(zhì)之類的抑制物(Willard et al.,1998)。100℃可使DNA變性,裂解細胞膜,破壞細胞膜,破壞細胞蛋白。通過快速離心使Chelex懸浮顆粒和細胞碎片沉降到離心管底部,上清液可直接進行PCR擴增反應。

    用Chelex提取的血痕或精斑DNA并不適用于RELP分型,因為Chelex在提取過程中使雙鏈DNA變性生成單鏈DNA。因此,只可進行PCR分析。但是,Chelex提取法可以去除PCR反應的抑制物,單管提取DNA減少實驗室污染的可能性,適用于PCR分型方法。

    在Chelex提取液中加入過多血液或者血痕也會抑制PCR。AmpFlSTR?試劑盒手冊推薦加入3ul全血或者近3mm×3mm的血痕。

聲明:該文觀點僅代表作者本人.
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