對于人類組織的性別鑒定,傳統(tǒng)的方法是依靠檢查性染色質(zhì)X小題和Y小題,操作不復雜,但靈敏度及正確率均不高。還可用放射免疫分析測定組織的性激素判定性別。如有大大組織(為子宮、前列腺、卵巢、睪丸等),可直接判定性別。如有骨骼,也可根據(jù)人類學方法判定性別?,F(xiàn)在人體組織性別檢測的方法主要靠分子生物學方法,有兩類:一類是Y染色體探針雜交,另一類是PCR法,后者由于靈敏度高,可用于微量組織及DNA已降解的組織,且操作方便,現(xiàn)已被廣泛使用。
1 Southern 印記雜交技術:首先提取人體組織的DNA,用限制性內(nèi)切酶消化后電泳,印記轉(zhuǎn)移,變性,然后與同位素標記的Y染色體特異探針雜交。Hirofuni(1988)設計的Y特異性DNA探針為1.9Kb用放射性同位素標記。Ryokobayash(1988)設計的Y特異性DNA探針為3.4Kb用生物素標記,如出現(xiàn)特異性帶必定為男性組織DNA,陰性可能為女性組織DNA或DNA含量太少。但該技術需要的DNA量較大,且靈敏較低。不適宜于腐敗組織及微量組織的檢測。
2 PCR法:用PCR法確定組織性別根據(jù)所檢測的性染色體,可分為三種方法。一種是Y染色體特異STR基因座的PCR法,第二種是X染色體特異STR基因座PCR擴增,第三種是擴增X染色體和Y染色體上同源的STR基因座確定組織的性別。
①Y染色體特異STR基因座的PCR擴增,常見的有DYZ1、DYS19、DYS385、DYS389、DYS390、DYS391等。DYS385基因座擴增產(chǎn)物為兩條帶,其余基因座擴增均為一條帶。出現(xiàn)特異性帶即為男性DNA。但未出現(xiàn)特異性帶卻不能肯定為女性組織。組織DNA嚴重降解,擴增體系出問題均可導致擴增失敗。
②X染色體特異STR基因座的PCR擴增,Szibor R(1995)測定了STRX1,HPRT,AGATSTR和DXS52等STR的基因型,X染色體特異性STR基因座還有:DXS1060、DXS8051、DXS987、DXS1226、DXS1214、DSX1068、DXS993、DXS986、DSX990、DXS1106、DXS8055、DXS1001、DXS1047、DXA1227、DXS8047、DXS8091、DXS1093。如果擴增產(chǎn)物為2條帶,則為女性組織,只有一條帶則無法確定是男性組織,還是女性組織。
③X染色體和Y染色體同源STR基因座的PCR法。常用的有AMG(Amelogenin)、ZFP和DXYS156基因座。