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DNA親子鑒定之商業(yè)化STR試劑盒

      很多單個(gè)或復(fù)合擴(kuò)增的STR遺傳標(biāo)記商業(yè)化試劑盒用于DNA分型。兩個(gè)主要的法醫(yī)DNA試劑銷售商是:Promega公司(t位于美國威斯康星州的Madison),AB公司(位于美國加州的Foster City)。在過去的十年中,這些公司進(jìn)行了大量工作,以試劑盒的形式為法庭科學(xué)提供可用的STR遺傳標(biāo)記。最近在歐洲,像Serac(Bad Homburg, Germany)、Biotype (Dresden,Germany)這樣的公司也開始提供商品化的STR試劑盒。

      從20世紀(jì)90年代后期,檢測技術(shù)開始飛速發(fā)展,檢測STR等位基因的方法更加靈敏、快速、準(zhǔn)確。同時(shí),可復(fù)合擴(kuò)增大量STR,從銀染系統(tǒng)的3、4個(gè)復(fù)合擴(kuò)增到15個(gè)STR的多色熒光標(biāo)記。
     美國CODIS采用的13個(gè)核心基因座,促進(jìn)這些STR遺傳標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的發(fā)展。在世紀(jì)交替之際,要得到全部I3個(gè)STR的信息需兩個(gè)PCR反應(yīng):PowerPlex?1.1和PowerPlex?2.1,或Profiler PlusTM和COfilerTM。為了減少樣本混淆的可能性,作為內(nèi)部檢測,試劑盒產(chǎn)品包含重疊的基因座,以便擴(kuò)增相同來源的生物檢材時(shí)獲得相同的數(shù)據(jù)。Ptofiler PlusrTM和COflerTM共有基因座為D3S1358 、D7S820,PowerPlex?1.1、PowerPlex?2.1共有基因座為TH01、TPOX、VWA。
      自從2000年開始,Promega和AB公司都推出了復(fù)合PCR反應(yīng)產(chǎn)品,在單個(gè)反應(yīng)中同時(shí)擴(kuò)增13個(gè)STR并加人性別分型標(biāo)記和兩個(gè)額外的基因座。PowerPlex~ 16的電泳片段分離PCR產(chǎn)物是可視的彩色基因座圖,各種顏色交替。AB公司的AmpFlSTR? Identifiler丁M試劑盒等位基因ladder。
     在技術(shù)章節(jié)中將會(huì)討論現(xiàn)代法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室分離檢測熒光標(biāo)記STR等位基因的兩種基本方法。上述試劑盒通常使用ABI毛細(xì)管電泳系統(tǒng)310或3100遺傳分析儀進(jìn)行分析。有一些PowerPlex試劑盒可以用日立FMBIOⅡ掃描儀分析。
      商品化的STR試劑盒是經(jīng)過大量研究后選擇確定的遺傳標(biāo)記,并分析了引物對(duì)之間能否匹配和它們在復(fù)合擴(kuò)增中能否聯(lián)合使用(Wallin et al.,2002; Krenke et al,,2002)。Promega公司發(fā)布和申請(qǐng)了他們PCR引物序列的專利(Masibay et al.,2000; Krenke et a1.,2002)。盡管一些引物序列信息已經(jīng)為大眾所知,AB公司仍保留引物序列的所有權(quán)。早期的法庭案件中,由于無法說明試劑盒的引物序列,STR技術(shù)不為法庭所采納,現(xiàn)在不再有這些問題。
      大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室沒有時(shí)間或來源進(jìn)行引物設(shè)計(jì)、PCR復(fù)合條件優(yōu)化和引物合成的質(zhì)控。廣泛使用的試劑盒和其條件,增加了實(shí)驗(yàn)室間共享數(shù)據(jù)的機(jī)會(huì),無懼無效的等位基因。在包含的基因座、聯(lián)合使用的熒光染料、標(biāo)記的DNA鏈、提供的等位基因ladder及PCR擴(kuò)增時(shí)使用的引物等方面,現(xiàn)已使用的STR復(fù)合系統(tǒng)均有所區(qū)別。需要謹(jǐn)記的是商業(yè)試劑盒快速指明了多數(shù)法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室可選用的STR。
聲明:該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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