唾液（斑）中含有脫落的口腔上皮細(xì)胞，唾液（斑）上皮細(xì)胞DNA的提取可采用有機(jī)溶劑提取法，Chelex - 100提取法和磷酸緩沖液法，具體操作如下：
1．有機(jī)提取法：
(1)將適量標(biāo)本剪碎置離心管中，加入Iml生理鹽水輕輕混勻沖洗細(xì)胞，5000r/min離J心
10min，棄上清后再重復(fù)一遍。
(2)在沉淀的上皮細(xì)胞中加入400t/l TES（15mmol/L Tris - HCl pH8.0，15mmol/L EDTA pH8.0, 15mmol/L NaCl），lOOoC溫浴lOmin，冷卻至室溫再加10% SDS, lOmg/ml PK，使其終濃度分別為1%，lOOtLg/ml，37℃消化過夜。
(3)等體積飽和酚和氯仿各抽提2次，上清用2.5倍體積冰無水乙醇沉淀，1000r/min離心lOmin，沉淀晾干，滅菌去離子水溶解備用（當(dāng)樣品中DNA含量很少時(shí)，如果用TE緩沖液溶解，其中的EDTA濃度過高，抑制TaqDNA聚合酶活性，所以此時(shí)建議用無菌水溶解DNA)。
2．Chelex - 100提取法：
(1)將適量斑跡剪碎，加入裝有200V1 5% Chelex溶液的離心管中。
(2)特lOmg/ml蛋白酶K2阻加入管中，輕輕混勻。高速震蕩溶液5～10s，一定要使沉淀懸浮起來。
(3)在56℃水浴中溫浴20min，高速震蕩溶液5～10s。
(4)100℃煮沸8min，高速震蕩溶液5～10s。
(5)在室溫下15000r/min離心2min。上清用于PCR反應(yīng)。4℃保存?zhèn)溆没?20℃儲(chǔ)存。
3．磷酸鹽緩沖液法：
(1)將適量斑跡剪碎，置于裝有Iml PBS緩沖液中，1500r/min離心5min，沉淀細(xì)胞，棄上清。
(2)用50—300μl鉀緩沖液懸起細(xì)胞沉淀。55℃消化1h(裂解細(xì)胞，釋放DNA)。
(3) 95℃水浴10min，滅活蛋白酶K，- 20℃保存?zhèn)溆谩?/div>
（二）口腔拭子中DNA的提取
1．將其放入裝有200til的5%c1．elex - 100的1.5ml離心管內(nèi)，輕輕攪動(dòng)，使細(xì)胞脫落。
2．56℃溫Y15～30min，高速振蕩5～10S。
3．100℃煮沸8min后立即高速振蕩5～10s，15000r/min離心2min。上清即可用于進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注意事項(xiàng)：
唾液斑檢材DNA提取，檢材加入量不易量化，應(yīng)結(jié)合檢材具體情況調(diào)整。建議如下：
1．煙蒂中能否提取出DNA與煙蒂是否沾有口腔脫藩上皮細(xì)胞有關(guān)，也與抽煙者抽煙時(shí)口含煙蒂多少的習(xí)慣有關(guān)，并不是所有煙蒂均能提取出足夠量的染色體DNA用于檢驗(yàn)，DNA的提取必需用沾有唾液或口唇上皮細(xì)胞的那部分檢材。不能將整個(gè)煙蒂全部投入，否則過大的載體會(huì)影響DNA的提取。煙蒂檢材一般剪取0.3～0.5cm高的煙蒂，將外層紙剪碎放入1.5ml離心管中；
2．口腔拭子是國外建立DNA數(shù)據(jù)庫首選的檢材，立法時(shí)它屬體外標(biāo)本。因此，用口腔拭子進(jìn)行PCR分型很多見。取單根拭子頭部的1/3～1/4裝入1.5ml離心管中或用牙簽刮拭口腔粘膜。
3．口香糖檢材取1/2左右，用無菌剪刀盡量剪碎，放入1.5ml離心管，如含泥土等，先用無菌水洗干凈。
4．咬痕唾液斑檢材，紗布或棉拭子擦拭咬痕部位。用紗布提取的剪取0.1～0.2cm2，棉拭子取頭部1/2外層部分。
聲明：該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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