DNA鑒定之Chelex提取法提起骨、牙組織的DNA
2020-11-04 22:36:20 來源: 法醫(yī)物證學(xué)
骨骼、牙齒由于有外部硬組織的保護(hù),因此能夠抵抗外界環(huán)境的影響,DNA不易被降解,在軟組織腐敗或炭化的情況下,從軟骨、骨骼、牙齒等硬組織中提取DNA是惟一的選擇。肌體軟組織高度腐敗肌肉變黑,甚至液化的情況下,從軟骨組織仍可能提取到DNA擴(kuò)增分型的模板,所以軟骨組織是理想的檢材。對于骨骼、牙齒樣本,宜選骨髓、牙髓,其次選擇干骺端、其他骨松質(zhì)豐富的部位,最后選擇骨密質(zhì)部分。
暴露在野外現(xiàn)場的骨骼、牙齒標(biāo)本首先要進(jìn)行清洗工作。將標(biāo)本用蒸餾水沖洗干凈、干燥,用滅菌細(xì)砂紙磨去骨外層部分,并在紫外燈下照射殺菌1~ 2h,以避免微生物或外源DNA的污染,再進(jìn)行以下步驟。
Chelex提取法:
1.較新鮮的檢材
腐敗尸體、碎尸等受多種因素影響DNA降解,因此可同時(shí)取骨、牙等檢材。
(1)取量1~5mg加5% Chelex - 100 200μl于56℃水浴中溫浴8h;
(2)高速震蕩5~10s,在100℃水浴中溫浴8min;
(3)高速震蕩溶液5~10s,在室溫下15000r/min離心2min,上清液4℃保存?zhèn)溆没?20℃儲存。
2.陳舊骨骼
(1)在1.5ml的離心管中加入2mg骨粉,用0.5ml滅菌去離子水清洗三次,棄去上清。
(2)在離小管中加入懸浮好的5%Chelex溶液200μl,10μg/μl蛋白酶K 4μl。高速震蕩溶液5~10s。
(3)在56℃水浴中溫浴8h,高速震蕩溶液5~10s。
(4)在100 ℃水浴中煮沸8min,高速震蕩溶液5~10s,在室溫下15000r/min離心2min。
取上清液用等體積氯仿:異戊醇(24:1)提純?nèi)危锨逡?℃保存?zhèn)溆没? 20℃儲存。
聲明:該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.