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DNA鑒定-三種DNA提取方法的比較

      QIAGEN法和IQ法在蛋白酶K消化法的基礎(chǔ)上均增加了用硅基質(zhì)作為材料的DNA純化步驟,因此均可以獲得純度較高的模板DNA,但對(duì)于甲醛固定石蠟包埋組織來(lái)說(shuō),二者的回收率有差別,QIAGEN法采用的是硅膠膜層析過(guò)濾技術(shù),可以去除部分降解形成的寡核苷酸碎片,DNA大片段“有效”模板的回收率相對(duì)較高;IQ法采用硅珠吸附洗脫技術(shù),獲得的DNA量與所用磁珠的數(shù)量和吸附力有關(guān),而體系中一定量的硅珠優(yōu)先吸附含量豐富的小片段DNA,故在樣品負(fù)載大的情況下有效,即使加大硅珠用量,DNA大片段“有效”模板的回收率也并不能顯著提高。Chelex-100法是一種由聚乙烯乙二烯苯組成的螯合基團(tuán),能螯合福爾馬林固定石蠟包埋( FFPE)組織在高溫裂解后釋放的內(nèi)源性二價(jià)金屬離子,如Mg2+上、Ca2+等,從而阻止其在高溫下斷裂DNA的作用,該法簡(jiǎn)單廉價(jià),一管到底,一步完成,能有效地降低福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織模板DNA的損失和外源性污染的發(fā)生,俚因所提取DNA模板的純度不高,并不能明顯改善PCR擴(kuò)增效果。

聲明:該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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