目前的DNA自動測序,均采用熒光標記及激光檢測系統(tǒng)。一糞采用平板電泳分離原理的測序儀,如ABI 377型,另一類是采用毛細管電泳分離原理的測序儀,如ABI 310、3100型等。ABI 377型自動DNA測序儀,采用四種熒光染料標記,標記終止物ddIVIP或引物5’端兩種方式均可采用。測序反應產(chǎn)物帶有不同熒光標記,一個樣品只占一個泳道上樣,經(jīng)電泳后A、C、G、T各個熒光譜帶分開,經(jīng)激光檢測器同步掃描,熒光物經(jīng)激光激發(fā)后,A、C、G、T分別產(chǎn)生綠、紅、藍、黃四色熒光,經(jīng)光柵分光后被CCD攝像機接收后同步成像,傳輸?shù)诫娔X中分別以綠、紅、藍、黃四種顏色存儲,電泳結束后,利用測序分析軟件自動分析結果。四種熒光染料分子量比較接近,因此產(chǎn)生的譜帶間距相等。377型DNA測序儀有四種類型:377 - 18、377 - 36、377 - 64、377 - 96,一次檢測樣品數(shù)目分別為18、36、64、96個。
377型DNA測序儀自動化程度高,有較高的精確性,還有以下實用特點:①多重熒光標記代表不同堿基信息,經(jīng)光柵分光可分別檢測并存儲,一次掃描可完成4種熒光的檢測;②分析效率高,測序速度高達200bp//j、時,一次電泳需6~8小時;③測序片段較長,可測定700多個堿基的DNA斤段;④電泳參數(shù)設置、數(shù)據(jù)收集分析以及結果輸出均由電腦控制,并設置有對儀器運行狀態(tài)的同步監(jiān)測。結果的輸出方式有凝膠圖譜、熒光吸收峰圖、堿基排列順序等3種,可供選擇;⑤采用水浴循環(huán)泵和溫度檢測器實時監(jiān)測,電泳溫度恒定,還可調(diào)節(jié)溫度適應各類特殊電泳要求;⑥軟件采用人機界面,簡便易學,配有多種軟件,適于多種用途分析,如DNA片段大小和定量分析、SSCP分析等;⑦簡化制膠程序,灌膠方便快捷;⑧測序方法靈活多樣,PE公司可提供20多種試劑盒,可滿足不同工作的需要;提供三種不同長度的凝膠電泳板,可根據(jù)對電泳時間和樣品分辨率的不同要求選擇,不僅可進行DNA序列分析,還可對DNA片段進行長度分析(分辨率可達lbp)和定量分析。
親子鑒定之DNA自動測序儀
2020-11-04 22:36:21 來源: 法醫(yī)物證學
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