同一基因座的STR基因分型是通過比較樣本與相同基因座等位基因ladder的大小而確定的,因而不同的電泳均需要有高精確度,才能保證等位基因ladder的電泳和未知樣本的電泳間正確比對(duì)。檢測系統(tǒng)的精確度通過在正常的系統(tǒng)操作條件下,對(duì)已知樣本或等位基因ladder進(jìn)行分析來確定。
分離和檢測平臺(tái)的精確度必須小于+/-0.5bp,既能分辨微變異等位基因,又能分離相差一個(gè)核苷酸的完全重復(fù)等位基因。通常情況下,PCR產(chǎn)物的分子量越大,檢測的錯(cuò)誤率越大。因此,與小基因座如D3S1358和TH01比較,如FGA和D18S51等較大STR基因座的等位基因會(huì)有較大的檢測變異。
對(duì)于ABI 310用戶,由于在兩個(gè)等位基因ladder間的大量樣本依次進(jìn)樣電泳,不同電泳之間的比較要求較高的精確度,以保證電泳間的比對(duì)。即使用平板電泳分析樣本,因?yàn)槊恳话迳?span lang="EN-US">ladder有限,比對(duì)不同泳道之間樣本時(shí)也要求高精確度。這一原則同樣適用于多個(gè)毛細(xì)管電泳分析系統(tǒng)。
ABI 310的精確度通常小宇0.1bp。即使電泳時(shí)2℃或3℃的微小室溫變化可以引起等位基因峰的漂移,與內(nèi)標(biāo)有輕微不同,就會(huì)導(dǎo)致片段長度不同。針對(duì)此問題,應(yīng)增加等位基因ladder的電泳,如每10個(gè)樣本作一個(gè),而不是20個(gè),這樣分析樣本時(shí)可利用與之最近的ladder。