從犯罪現(xiàn)場提取的血痕或精斑,或者是從嫌疑人或親緣鑒定中提取的血液樣本,這些生物檢材除DNA外還包含許多物質(zhì)。在分析DNA前,必須將DNA_同其他細胞物質(zhì)分離。細胞中包裹、保護DNA的細胞蛋白可抑制DNA分析。因此,DNA提取方法是將蛋白和其他細胞物質(zhì)同DNA分子分離。另外,為了保證得到較好的結(jié)果,在進一步分析之前常需檢測DNA的質(zhì)和量。
目前法醫(yī)DNA實驗室最常見的三種DNA提取方法是:有機提取法、Chelex法和FTA卡。根據(jù)被檢生物樣本類型選用精確提取或DNA分離方葚:例如,全血的提取方法與血痕、骨骼組織不同。
有機提取法,有時也稱做酚.氯仿提取法,應(yīng)用已很久,仍用于RFIP或PCR的分析。用有機提取法可更有效地獲琶趨坌量螢的D墜,這對RFIP來說是必需的。
Chelex法比有機提取法更快捷。另外,Chelex法的步驟較少,可減少樣本間的污染。chelex法獲得的是多筵DNA!只能用于PCR的檢測。
無論用哪種提取方法,所有樣本都應(yīng)該認真處理,以減少樣本間或外源DNA的污染。在法醫(yī)DNA分析過程中,提取過程是實驗室中DNA樣本最易被污染的階段。因此,實驗室經(jīng)常妥分時間段處理證據(jù)樣本,有時甚至要在不同地方處理。
參照樣本最常見的準備方法是將一滴血滴在棉布上制成1 CII12大小的血痕。一滴血即10μl的全血,其中,白細胞數(shù)量接近70 000~80 000個,基因組DNA近500ng。實際含量可因樣本中白細胞數(shù)日和DNA提取過程的效率而改變。
已提取的DNA通常貯存在- 20C的冰箱中,如果要長期保存則存于- 800C的冰箱中,以防核酸酶的影響。核酸酶是在細胞中發(fā)現(xiàn)的一種酶,可以降解DNA以利核酸組分的再生。核酸酶的作用需鎂離子的存在,因此,防止核酸酶消化血液DNA的方法之一是用含EDTA抗凝劑的紫色蓋試管轉(zhuǎn)運全血,EDTA可螫合或連接游離的鎂離子,從而防止核酸酶裂解DNA。