親子鑒定位點的篩選步驟:
1、提取全長的基因組DNA,然后用限制性的酶切割全長DNA片段,通過連接酶把限制性的片段連到載體上構(gòu)成基因組文庫。
2、通過特異的串聯(lián)重復序列的探針雜交篩選基因組文庫。
3、對于陽性克隆進行測序。
4、通過鍘序結(jié)果設計引物及進行位點特異的PCR分析。
5、位點多態(tài)性分析。
親子鑒定位點的篩選原則應該遵循以下幾點:
1、篩選的親子鑒定位點應該是廣泛分布于人群中的。
2、重復片段長度為2-6個堿基之間。
3、親子鑒定位點應具有高度的雜臺性,盡量選擇種屬特異性高的基因座。
各個親子鑒定基因座位點在染色體上的定位相對較遠,基因座位點的重復次數(shù)應該是4個核苷酸單位,小于4十桉苷酸單位的重復次數(shù)的親子鑒定位點容易產(chǎn)生影子帶確保無連鎖,低突變率。
親子鑒定位點的命名;比如D22S119位點D代表DNA,22指的是第22號染色體,S指單一序列,119指該位點在染色體上的位置。親子鑒定位點CSFIPO,F(xiàn)CA,及TH01,vWA等按照國際法醫(yī)遺傳學會DNA委員會(ISFH DNA commIssion)的方法對各位點等位基因進行命名,即以核心序列重復的歡數(shù)來命名各位點的等位基因。
CSFIPO, FGA, TH01, TPOX, VWA,D3S1358, D5S818, D7S820, D8Sl179, D13S317, D16S539,D18SS51,D21S11,D21S11和性染色體(Amelogenin)是FBI用來進行法醫(yī)鑒定常用的位點。13個多態(tài)性的親子鑒定位點和一個性染色體基因能夠分三次PCR擴增產(chǎn)生14位點的DNA分型圖譜。這13個位點被命名為CODIS Loci。為了PCR擴增片段的分離及檢測更加的靈敏,加入了5個重復單位的親子鑒定位點PentaD,PentaE,多態(tài)性程度高,而且5個重復單位的片段有較少的影子帶(Bacher et al.,1998)。另外北京公司研制的試劑盒增加了D19S433,D16S1043,D2S441、D12S391,D2SL338位點,隨著位點數(shù)目的增加檢測的精確度也隨之增加。